實驗室凈化工程
來源：www.bohejianfei.cn 作者：空氣好凈化
發(fā)布時間:2021-04-29 15:35:51點擊:次
潔凈實驗室要求：
1、實驗室環(huán)境應清潔、衛(wèi)生、安靜，實驗室內(nèi)嚴禁吸煙和飲食。
2、實驗人員必須穿戴工作衣帽，工作服經(jīng)常洗滌、消毒、保持清潔。
3、操作前后或離開實驗室必須用肥皂或消毒液洗手。
4、發(fā)生菌液污染臺面或地面，應立即用3％甲醛或5％碳酸等消毒液由外向內(nèi)傾覆其上，1小時后再擦拭，如為破傷風梭菌，則應隔夜后再擦洗。
5、工作衣、帽、口罩受到菌液污染時，應立即脫下使污染部位包裹在內(nèi)部，高壓滅菌后再清洗。
6、如有傳染性培養(yǎng)物污染手部，應先用75％乙醇棉球擦拭，再浸入0.1%新潔爾滅消毒液內(nèi)泡手，然后再用肥皂及清水徹底洗干凈。
7、接種環(huán)（針），每次使用前后，必須通過火焰滅菌，冷卻后方可接種培養(yǎng)物，接種帶有蠟質、油質的培養(yǎng)物或菌苔殘留多時，不應立即在火焰上灼燒，應先在內(nèi)焰里將油質培養(yǎng)物烘干后再移至火焰上滅菌，以免活菌外濺污染環(huán)境及感染操作者。
8、帶菌的吸管應浸泡在5％甲酚消毒液內(nèi)24h后取出清洗，帶菌的試管或培養(yǎng)物應在121℃高壓滅菌30分鐘后再取出清洗。
9、在接種霉菌、放線菌時應在鋪有浸過消毒液的紗布上操作，防止孢子散落傳播。
10、廢棄物的處理：
必須消除生物危害后，才能處理，一般使用高壓蒸汽滅菌，也可以采用直接焚燒。
污染性銳器（如一次性針頭）應滅菌后處理，注意避免銳器扎傷。
污染性可重復使用的材料（如平皿）應滅菌后清洗，宜使用不易破碎的材料。
工作服（含潔凈工作服）應定期清洗，懷疑污染的工作服應滅菌后清洗，潔凈工作服應滅菌后使用。
無菌操作要求：
無菌操作是指在無菌的環(huán)境條件下，使用無菌器材，防止微生物污染的操作技術。即保持待檢樣品在操作時不被污染，又要防止被檢的微生物及陽性對照菌在操作中污染環(huán)境或感染操作人員。從事無菌及微生物操作的工作人員必須經(jīng)過無菌技術及基礎微生物學專業(yè)知識的學習及培訓才具備上崗操作的資格，微生物專業(yè)檢驗人員也不應該頻繁地變換工作崗位。
1、無菌室應每次使用前后用0.1%苯扎溴銨溶液或2％甲醛液擦拭工作臺面及可能污染的死角，濕拖地面，打開無菌空氣過濾器及超凈工作臺的開關30分鐘，紫外線殺菌燈照射1小時。
2、操作人員用肥皂洗手后進入緩沖間換拖鞋，用75％乙醇棉球擦手，穿戴工作衣帽、口罩。將所需物品剝?nèi)ヅＦぜ埣巴獍b，從傳遞窗移入操作間，再用0.1%苯扎溴銨溶液泡手后進入操作間，在乙醇（或煤氣燈）火焰區(qū)（火焰高度3－5cm）操作。
3、供試品表面消毒，如為安瓿先用砂輪劃痕后用2％碘酒棉球擦拭，再用75％乙醇棉球擦拭、待干，也可以用消毒液浸泡消毒。
4、操作者勿用嘴直接吸吹吸管，防止致病菌感染操作人員及口中的雜菌污染供試品。
5、在無菌操作中切勿大幅度或快速動作、拖行，以免攪動空氣中塵埃微粒。
6、注射器如需回抽時，應對著火焰吸入無菌空氣。
7、所用的器材如培養(yǎng)基、稀釋劑配制后經(jīng)濕熱滅菌121℃30分鐘，吸管培養(yǎng)皿等均應洗滌，干燥，包扎后經(jīng)干熱滅菌160℃2小時才能使用。
消毒劑的質量控制
（一）消毒劑安全使用原則
1、正確選擇消毒劑的種類，盡可能選擇低毒、低殘留的消毒劑。
2、正確選擇使用濃度，確保消毒效果。
3、正確選擇消毒方式，可以浸泡、擦拭或噴霧。
4、嚴格掌握消毒時間。
5、定期更換，避免產(chǎn)生耐藥性。
6、不聯(lián)用和混合使用。
7、消毒前，應進行清潔。
（二）消毒劑的種類
1、高效消毒劑（HLD）：能殺滅一切微生物（包括芽孢），常見的有過氧乙酸、甲醛、環(huán)氧乙烷和含氯消毒劑
2、中效消毒劑（ILD）：能殺滅抵抗力較強的結核桿菌和其他細菌、真菌和大多數(shù)病毒，常見的有乙醇、苯扎溴銨、碘酊和甲酚皂溶液等
3、低效消毒劑（LLD）：能殺滅除結核桿菌以外的抵抗力較弱的細菌以及抵抗力較弱的真菌（如念珠菌）和病毒（如流感病毒、艾滋病毒等），常見的有氯已定、三氯散和高錳酸鉀等
消毒劑配制
1、根據(jù)消毒劑使用區(qū)域和對象的不同，將消毒劑分成3類，分別是：
第一類消毒劑，專用于普通實驗區(qū)，僅用于物品外表面的消毒，常用的有聚維酮碘和石炭酸等；
第二類消毒劑，專用于潔凈室的更衣室，僅用于佩戴手套的雙手消毒，常用的有苯扎溴銨和75％乙醇；
第三類消毒劑，專用于無菌操作間，直接用于消毒直接接觸藥品的容器表面，也用于實驗操作過程中的手部消毒和實驗臺面消毒，常用的有聚維酮碘溶液和75％乙醇。
2、配制
第一類消毒劑的配制方法：不需使用無菌器具，可直接在普通實驗區(qū)按消毒劑使用說明書的配制方法，用純化水稀釋消毒劑的濃溶液后使用。
第二類消毒劑的配制方法：不需使用無菌器具，應在更衣室內(nèi)按消毒劑使用說明書的配制方法，用純化水稀釋消毒劑的濃溶液后使用。
第三類消毒劑的配制方法：需要使用無菌器具并在無菌操作間內(nèi)配制。首先取一次性集菌過濾器一個，將排液口放置在滅菌過的錐形瓶上，將消毒劑濃溶液通過薄膜過濾的方式除菌。然后，按比例取滅菌后的純化水，稀釋濃溶液，制成可供使用的消毒劑。將此消毒劑倒入放置有無菌脫脂棉球的消毒劑缸中，得到可直接使用的消毒劑棉球。（該類消毒劑制備后，應收集消毒劑中的微生物）
環(huán)境監(jiān)控
（一）目的：
確定工作臺面、設備表面的消毒效果和消毒頻次，確定潔凈室的綜合性能以及進行維護的時機，確定培養(yǎng)箱的污染情況，判斷是否有必要進行徹底消毒。
（二）環(huán)境監(jiān)控的對象
1.樣品貯存的環(huán)境
2.培養(yǎng)基制備的環(huán)境
3.樣品制備和檢驗的環(huán)境
4.培養(yǎng)的環(huán)境
（三）環(huán)境監(jiān)控的方法
1.表面微生物數(shù)
擦拭法（棉拭子法）
淋洗法
影印盤法（RODAC法）
2.空氣微生物數(shù)
沉降菌法 浮游菌法
浮游菌數(shù)的測定：采用浮游菌測定儀。
沉降菌數(shù)測定：方法：無菌室及凈化工作臺面消毒擦拭后，打開層流凈化裝置及凈化工作臺開關30min，將營養(yǎng)瓊脂平板3個及玫瑰紅鈉瓊脂平板3個（直徑9cm），置凈化工作臺左、中、右各1個，開蓋暴露30min后將蓋蓋上，分別放在30－35℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h及25－28℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)72h，細菌和真菌平均菌落數(shù)小于等于1個為100級。實驗室一旦被污染，潔凈度達不到要求，可以清洗或更換凈化工作臺過濾器，用甲醛或丙二醇、乳酸熏蒸消毒，方法：在支架上放一個燒杯（內(nèi)裝少許甲醛，8ml／平方米），下面放一個裝有少許乙醇的乙醇燈，點燃后，關閉門窗，乙醇用盡后燈自滅，甲醛蒸氣充滿無菌室，密閉24h。
缺點：甲醛蒸氣易銹蝕儀器，對人有刺激，可用氨水噴霧中和，減少對人眼的刺激。
環(huán)境監(jiān)控的評價指標
1.表面微生物數(shù)
1.1需氧嗜溫菌小于5cfu/cm2，合格
1.2需氧嗜溫菌在5～25cfu/cm2之間，需進一步調(diào)查
1.3需氧嗜溫菌大于25cfu/cm2，不合格，應立即消毒處理
2.空氣微生物數(shù)
沉降菌大于15cfu/板，應暫停工作，進行消毒